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气象色谱-质谱联用GC-MS

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GC-MS( Agilent 7890A-5975C)可以检测结肠癌组织原发灶和转移灶中各种氨基酸的变化,图中黑色的峰代表癌组织原发灶,蓝色的峰代表转移灶。可以对各色谱峰进行积分,求出峰面积,这样就可以比较不同组织中氨基酸表达量的差异。

GC-MS组织样本处理(三羧酸循环产物)

1、称取70mg小鼠肝脏组织
2、加入20倍甲醇(70mg组织加1.4ml)
3、将组织剪碎
4、匀浆 60HZ  90s,4度孵育2小时以上(可-20℃过夜再离心)
5、常温 离心14000rpm 10min
6、取上清200ul(放冰上,使甲醇不那么粘稠,容易被吸上来,取的量一定要一致)
7、烘干(4hrs,时间不宜过长)
8、加入20ul甲氧胺吡啶,涡旋V瓶
9、70℃ 30min
10、室温自然冷却
11、加入20ul MTT,涡旋,离心,70℃ 40min
12、室温自然冷却
13、离心,上机

GC-MS细胞样品处理(三羧酸代谢产物)

以60mm板 细胞长满为例
1、80%甲醇提前一天-80℃过夜
2、PBS洗两遍细胞,尽量不要冲起细胞
3、各加入1ml甲醇,尽量不要冲起细胞,4度摇床摇一小时或更久
4、收上清,4℃,13000rpm,5-7min
5、第4步以后可以直接放-20℃很久或-80℃
6、取500ul上清到干净的GC-MS衍生瓶中,用真空浓缩仪(V-HV模式)干燥4小时
7、加入35ul甲氧胺吡啶,涡旋2min,尽可能充分冲下挥发到管壁上的代谢物
8、70℃ 30min 孵育(或37℃ 24hr)
9、室温自然冷却
10、加入20ul MTT (MTT 绝不能接触水分,所以从4℃拿出后,用纸包着,用手捂至室温,再开盖)
11、充分涡旋
12、70℃ 40min或更久
13、室温自然冷却
14、上机

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