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varian高分辨核磁共振仪

预约方法:电话或邮件预约,确认实验类型和大概需要的实验机时。

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应用说明
高分辨核磁共振用于研究蛋白质溶液结构及蛋白与蛋白或蛋白与小分子相互作用机制具有其自身优势。
(1)通过高分辨核磁共振可以直接解析蛋白质溶液结构

(2)通过高分辨核磁共振归属蛋白质主链核磁谱峰,通过小分子滴定实验,得到参与小分子结合的关键氨基酸,能够给出蛋白与小分子的结合机制相关信息。

NMR 600M样品制备及操作流程

NMR是我们实验室最常用的研究蛋白质溶液结构及蛋白与蛋白或蛋白与小分子相互作用机制的方法。

一、蛋白质样品的准备
用于核磁谱测定的蛋白一般纯度要求90%以上,针对不同类型的实验,对蛋白浓度有不同要求,普通1HNMR需要浓度较低,几十微摩以上;HSQC等二维相关谱需要0.1毫摩以上;三维谱依据蛋白大小不同一般需要0.5~1.0毫摩。一般蛋白溶解于PBS buffer,pH 6.8左右。实验样品一般需加入10% D2O 进行锁场(普通核磁管总体积500uL)。

二、基本操作流程
1、将核磁管置于转子中(A),核磁管下压至合适深度(B)。

2、Eject, 将样品管小心置于核磁上方,inject,样品慢慢落入磁体。

3、VNMRJ 上操作,调节样品信息,溶剂为10% D2O;锁场,tuning,匀场。反复调至理想的锁场强度70%左右,并寻找最合适的tof,pw等参数值。

4、根据实验需要选择相应的脉冲序列;并设置相应参数进行实验。

5、使用vnmrj,nmrpipe,sparky等核磁数据处理软件处理相应实验的数据。

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