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联用LTQ-Orbitrap液质联用仪

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样品制备和操作规程

液质联用仪是精密仪器,准备样品前请与仪器负责人充分交流!

样品制备

(0)待测样本不能含有无机酸碱、去垢剂,可以含有少量的盐(总量<5ng)。蛋白质样品可以经超滤、透析或丙酮沉淀纯化,也可以用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)处理(请知晓凝胶蛋白提取率比溶液低)。多肽寡核苷酸样本可以采用ZipTip、Zeba等脱盐柱进行纯化脱盐。
(1)处理完毕的样品需经过真空完全干燥后用重溶液溶解。
(2)重溶液的组分请与仪器负责人充分交流确定选用的仪器方法后由仪器负责人选定。重溶液一般是由A:0.1%甲酸(v/v)水溶液和B:0.1%甲酸(v/v)乙腈溶液以一定的比例混合而成,可以自行准备,4℃长期保存无虞。以上所有试剂纯度都应至少是HPLC级,推荐LCMS级。
(3)重溶完成后样品需高速离心去除不溶物和其他杂质后转移到进样瓶中,转移完成后对着灯光检查确保瓶中没有气泡。

操作规程
(4)分别在nanoHPLC的Inlet Method界面和LTQ-Orbitrap的TunePlus界面检查仪器与控制电脑的通讯是否正常,确保前者界面上没有红色气泡图标(若有,则选择菜单上的LC→Reset Communications等待仪器与电脑完成重新通讯。若两次reset后仍有红色气泡则请联系仪器负责人)后者右侧的Status View界面上除“spray current”项外都是绿色√没有红色×(若有请联系仪器负责人)。
(5)nanoHPLC的控制软件是MassLynx,软件界面上File Name请根据样品情况自取(请注意MassLynx会覆盖同名文件),Inlet File是色谱方法,鼠标双击选择仪器负责人选定的方法文件,Bottle和Inject Volume参数也会由仪器负责人告知,鼠标单击后直接修改。修改完成后请保存。
(6)LTQ-Orbitrap的控制软件是XCalibur,进入Sequence Setup模块后,File Name和Path请根据样品情况自取(XCalibur软件会自动进行文件重命名不会覆盖同名文件),Inst Meth是质谱方法,鼠标双击选择仪器负责人选定的方法文件。修改完成后请保存。
(7)在XCalibur软件选择需要运行的队列,单击2.jpg按钮,在弹出窗口中选择“OK”。在MassLynx软件选择需要运行的队列,单击2.jpg按钮,在弹出窗口中选择“OK”。
(8)用完后按照(4)的顺序再检查一遍通讯情况。仪器控制电脑原则上不允许使用U盘或移动硬盘,如需自行备份数据请用FTP传输或联系仪器负责人。

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