分子细胞生物学子平台
首页 > 技术平台 > 分子细胞生物学子平台

HydroShear DNA剪切仪

预约方法:电话预约

2.jpg

HydroShear DNA剪切仪操作指南

设备简介:
HydroShearDNA片段仪是软件自动控制的,利用水力剪切的专业DNA片段仪。它为随机短 DNA片段的获得提供了最简便,重复性佳,控制灵活的自动操作平台,保证了下游文库构建等实验用 DNA 样本的质量。GeneMachines HydroShearDNA片段仪有多种剪切组件可选以获得不同大小的剪切片段,满足用户多种要求,其可获得的最小片段长度为1kb,且90%以上的片段在2倍片段大小范围内。剪切后的片段无需末端修补即能进行连接反应,是进行后续克隆的理想选择。整个系统包括仪器,软件,专用洗涤液及工具盒。

主要特点:
1. 操作迅速:样品载入,剪切及洗涤整个操作可在10分钟内完成;
2.重复性佳:只要实验条件(起始片段长度,样品体积,浓度,参数设置)相同,就可得到一致的结果,避免不同操作者之间的操作误差;
3.最小DNA样品体积可达40ul;
4.控制灵活:可根据用户要求随机剪切,产生多种长度范围的DNA片段。

应用领域:
1.  基因组克隆及亚克隆
2.  基因组测序
广泛用于基因组及表达分析,基因功能,转基因研究等领域。

操作指南:
(1)所需试剂
λDNA(20ug/ml),500bp及1kb的ladder,蒸馏水/1×TE缓冲液(pH8.0),0.2M NaOH,0.2M HCl,1%琼脂糖胶
(2)所需设备
振荡器,离心机,核酸电泳仪,核酸测定仪,加样器及Tip头,离心管,冰盒,过滤器和相应滤膜(孔径不超过0.2um)。
(3)实验前准备:
样品处理:将λDNA用蒸馏水或TE(pH8.0)buffer稀释到20ug/ml,使用前可用核酸测定仪进行浓度及纯度核对。注意保证完全溶解,如果有不溶物,请进行以下操作:
a. 37度温浴30min,每隔10分钟充分振荡。
b. 在剪切之前,室温下离心14000rpm,15-25分钟。
如果有沉淀,重复a、b操作直至无沉淀产生。可能需要加更多的溶液稀释使样品完全溶解。此外,上样时要排除气泡。
洗涤液处理:洗涤液0.2M NaOH,0.2M HCl,1×TE缓冲液(pH8.0)等要保证处于溶液状态,最好使用前进行过滤(滤膜孔径不超过0.2um)。
参数设置:分别选取速度代码3,9,15进行校准及检测。每次样品用量100ul。循环数20。
洗涤设置:在上样前及使用后都需洗涤:推荐HCl-4个循环;NaOH-4个循环;蒸馏水或后续剪切使用的buffer-4循环
电泳检测:1%琼脂糖电泳,样品上样量0.2ug,上样包括markers,样品及剪切前对照等。
105v约1小时,剪切获得的平均片段长度分别为1-2kb,1.5-3kb,5-10kb。
(4)简要实验流程:
样品及洗涤液准备-开机/软件参数设置-洗涤-上样-剪切-收集样品-洗涤-电泳检测

Top